ELISA test otkriva brojne bolesti, zbog čega je pronašao široku primjenu u medicini i više. Međutim, ELISA test najpoznatiji je po dijagnozi Lajmske bolesti. Što je ELISA test? Kako protumačiti rezultate? Koja je cijena testa?
Sadržaj:
- ELISA test - što otkriva? Primjena ELISA testa
- ELISA test - što je test?
- ELISA test i Lymeova bolest - kada izvesti?
- ELISA test - cijena. Koliko košta ELISA test?
- ELISA test - rezultati. Mogu li biti lažno pozitivni?
- ELISA test - rezultati. Mogu li biti lažno negativni?
ELISA test, tj. Enzimski imunološki test, uobičajena je laboratorijska metoda koja, između ostalog, služi za kvantitativno otkrivanje antitijela u krvi.
Iz tog je razloga ELISA test našao primjenu u dijagnozi bakterijskih bolesti, poput lajmske borelioze.
Prednost ELISA metode je jednostavnost i mogućnost brze implementacije, kao i velika osjetljivost. ELISA metoda provodi se pomoću posebnih plastičnih ploča s jamicama napunjenim npr. Proteinima Borrelia (antigenima) i specifičnim monoklonskim antitijelima koja su dizajnirana za otkrivanje antitijela u uzorku pacijenta.
ELISA test - što otkriva? Primjena ELISA testa
Visoka osjetljivost i jednostavnost ELISA metode učinili su je primjenjivom u dijagnozi mnogih bolesti, ali najpoznatija je kao dijagnostička metoda Lymeove bolesti.
U slučaju dijagnoze lajmske borelioze, tzv neizravni ELISA, koji omogućuje otkrivanje specifičnih IgM ili IgG u ispitivanom materijalu. Na isti se način za dijagnozu mogu otkriti antitijela:
- virusne infekcije: herpesvirusi (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, citomegalovirus), HIV, virusi hepatitisa (HBV i HCV)
- protozojske infekcije: toksoplazmoza, giardijaza
- autoimune bolesti: celijakija (antitijela protiv tTG ili anti-DPG), Hashimotova bolest (antitijela protiv TG i anti-TPO), upalne bolesti crijeva (antitijela protiv ASCA i anti-ANCA)
- parazitske bolesti i alergije kod kojih se otkrivaju specifična protutijela IgE. Njihova povećana razina može ukazivati na prisutnost alergija, npr. Na pelud i hranu ili parazitsku zarazu (naoružana trakavica, ljudska okrugla glista)
Postoje i modifikacije ELISA metode (tzv. Sendvič ELISA), koje omogućuju otkrivanje uzorka proteina koji nisu antitijela. Tada je cilj ispitivanja u biološkom materijalu otkriti:
- fragmenti virusa ili bakterija, najčešće su to antigeni karakteristični za određeni patogen
- serumski hormoni, npr. estrogen, prolaktin, TSH, fT4, kortizol
- enzimi, npr. kalprotektin, elastaza gušterače, alkalna fosfataza
- tumorski biljezi, npr. CA-125
- prisutnost lijekova u serumu
Ova metoda je također primjenjiva u prehrambenoj industriji, gdje može otkriti tragove alergena (npr. Mlijeko, kikiriki), GMO ili toksine u hrani.
ELISA test - o čemu se radi?
Dijagnoza, na primjer, lajmske borelioze ELISA metodom sastoji se u otkrivanju imunoloških proteina u biološkom materijalu - antitijela koja nastaju tijekom odgovora na antigene Borrelia.
Protutijela se ispituju u dvije klase, IgM i IgG. IgM su prva antitijela koja se pojavljuju u tijelu kada dođu u kontakt s bakterijama i oni vremenom propadaju.
Njihovo mjesto zauzimaju postojanija IgG antitijela koja mogu ostati u tijelu nekoliko desetaka godina.
Na taj se način prisutnost bakterija u tijelu neizravno ispituje otkrivanjem antitijela posebno usmjerenih protiv borelijskih spiroheta.
Protutijela u različitim fazama infekcije mogu biti usmjerena protiv različitih proteina Borrelia. Na primjer, u ranoj fazi to je protein p41.
U kasnijim fazama počinje se pojavljivati sve više i više bjelančevina, poput p21, p30, p39, p43. To je razlog zašto je dijagnoza Lymeove bolesti izuzetno teška.
Odabir bakterijskih bjelančevina izuzetno je važan kako bi test imao visoku dijagnostičku vrijednost. Stoga bi se rutinski u dijagnozi Lymeove bolesti trebali koristiti ELISA testovi II ili III generacije, u kojima se odabiru skupovi bjelančevina kako bi se dobio najpouzdaniji rezultat.
ELISA test i Lymeova bolest. Kada učiniti?
Lajmska borelioza je bakterijska bolest koju uzrokuju bakterije Borrelia burgdorferi i njene brojne sorte.
Dijagnoza bolesti nije laka zbog složenosti imunološkog odgovora na boreliju i nesavršenosti laboratorijskih metoda.
Najčešće korištena laboratorijska metoda je visoko osjetljiva ELISA metoda koja otkriva specifična antitijela podignuta protiv bakterijskih proteina.
U dijagnozi lajmske borelioze koristi se neizravna ELISA metoda u kojoj se razlikuju sljedeće faze:
- inkubacija jažica na ploči s materijalom prikupljenim od pacijenta, npr. serumom. Ako u ispitivanom materijalu postoje antitijela protiv borelije, oni se vežu za proteine na dnu reakcijske jame
- zatim se višak seruma ispire posebnom tekućinom za pranje (pufer) i tzv konjugat, koji je enzimski vezano antitijelo koje se veže na prethodno povezana antitijela u reakcijskim jamicama
- tada se doda supstrat za konjugat i dogodi se reakcija boje (pozitivan rezultat) ili nikakva reakcija boje (negativni rezultat)
- posljednji je korak čitač (spektrofotometar) očitao koncentraciju antitijela protiv borelije u serumu pacijenta
ELISA test za Lymeovu bolest provodi se iz krvi, a u slučaju neuroloških simptoma (neuroborelioza) i iz cerebrospinalne tekućine.
Sinovijalnu tekućinu ne treba ispitivati jer postoji velika vjerojatnost lažno pozitivnih rezultata.
Osnova za dijagnozu bolesti su klinički simptomi koji to ukazuju, potvrđeni rezultatima laboratorijskih ispitivanja.
Dodavanje rezultata laboratorijskog ispitivanja bez simptoma ne odobrava dijagnozu Lajmske bolesti, jer je dokazano da se antitijela protiv borelije otkrivaju i kod zdravih ljudi.
Serološka dijagnoza lymske borelioze započinje polukvantitativnim probirnim ELISA testom. Ako je rezultat negativan, znači da nisu otkrivene spirohete borelije ili je rezultat lažno negativan.
Ako je rezultat pozitivan ili slabo pozitivan (dvosmislen), treba provesti potvrdno Western blot testiranje, koje karakterizira velika specifičnost.
Ovo potvrđuje da su ELISA rezultati "istiniti". Tijekom dijagnostike ne možete preskočiti nijedan od gornjih koraka i, na primjer, odmah izvršiti dijagnozu metodom Western blot ili postaviti dijagnozu samo na osnovu pozitivnog ELISA rezultata.
U Poljskoj dijagnoza Lymeove bolesti vrlo često završava u prvoj fazi probira, što uzrokuje pogrešno tumačenje pozitivnih ili slabo pozitivnih rezultata.
Preporučeni članak:
Test transformacije limfocita (LTT) Dobro je znatiELISA test - cijena. Koliko košta ELISA test?
Test košta oko 60 PLN i provodi se odmah. Međutim, na rezultate upućivanja možete pričekati oko tri mjeseca.
ELISA test - rezultati. Mogu li biti lažno pozitivni?
Lažno pozitivni rezultati rezultat su unakrsne reaktivnosti IgM antitijela s drugim proteinima. Protutijela koja stvara tijelo mogu 'pogrešno' prepoznati antigen iz drugih mikroorganizama kao antigen Borrelije.
Najčešće se "pogreške" javljaju kod osoba zaraženih treponema pallidum (latinski: Treponema pallidum), herpesvirusa i kod ljudi sa sistemskim eritemskim lupusom i drugim reumatskim bolestima.
ELISA test - rezultati. Mogu li biti lažno negativni?
Lažno negativni rezultati mogu se pojaviti u ranoj fazi infekcije, u tom slučaju test treba ponoviti nakon otprilike 3-4 tjedna. Ovo se zove serološki prozor, to je početno razdoblje infekcije u kojem tijelo još nije "uspjelo" stvoriti specifična antitijela.
Isto se odnosi na ljude s imunodeficijencijom koji ne proizvode dovoljno antitijela.
Veliki problem, posebno kod vrlo intenzivnih infekcija, je pojava tzv imuni kompleksi koji se sastoje od antigena borelije i specifičnih antitijela za njih.
Kao rezultat, antitijela postaju "nevidljiva" za najčešće korištene metode kao što je ELISA, i iako su prisutna u ispitivanom materijalu, ne mogu se otkriti.
U takvim slučajevima laboratorij može koristiti razgradnju imunoloških kompleksa. Ovaj tretman osmišljen je za oslobađanje protutijela. Međutim, ova se metoda ne koristi široko zbog nedostatka standardizacije u laboratorijima.
Vrijedno znatiZašto dijagnoza Lymeove bolesti nije laka?
To je zbog složenosti imunološkog odgovora na boreliju i ograničenja laboratorijskih metoda. Raznolikost sorti i pojava novih koje uzrokuju infekcije, posebno na europskom kontinentu, ne olakšavaju razvoj učinkovitih dijagnostičkih metoda.
U Europi se nedavno pojavilo više sorti, poput Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana i Borrelia spielmanii. Osim toga, u tijelu se borelijske spirohete mogu pretvoriti u ciste ili ostati na mjestima tijela nedostupnim stanicama imunološkog sustava.
Tako biti "nevidljiv" za imunološki sustav. Osim toga, pokazano je da tkiva mogu sadržavati fragmente bakterija koje imaju snažno proupalna svojstva. Vjeruje se da su odgovorni za kronične simptome Lymeove bolesti, unatoč negativnim rezultatima laboratorijskih testova.
Književnost
1. Witecka-Knysz E. i sur. Lajmska bolest: zašto je dijagnoza tako teška? Laboratorijski dijagnostičar travnja 2007.
2. Moore A. i suradnici: Trenutne smjernice, uobičajene kliničke zamke i buduće upute za laboratorijsku dijagnozu lajmske bolesti, Sjedinjene Države. Emerg Infect Dis. 2016. srpnja; 22. (7).
3. Laboratorijska dijagnostika bolesti koje se prenose krpeljima. Preporuke radne skupine: Nacionalna komora laboratorijskih dijagnostičara, Nacionalni institut za javno zdravstvo-Nacionalni institut za higijenu, Nacionalni savjetnik za područje zaraznih bolesti, Odjel za infektivne bolesti i neuroinfekcije, Medicinsko sveučilište u Białystoku, Poljsko društvo za virusologiju, Varšava 2014.
4. Hosseini S. i sur .: Enzimski vezani imunosorbentni test (ELISA) od A do Z. Springer 2017.
